[﷽]
السلام عليكم👋

#Microbiology:-
#General_Bacteriology:-

#بوست_رقم_[5]:-


GRAM STAIN:-
"""""""""""""""""""""

❐ في البدء نووه إنو الجزئية دي تابعة للعملي🔬، ولكن لأهميتها كان لابد من دراستها.

❐ في عام 1884م فكر🤔 العالم الدنماركي 👈 Christian Gram ف تصنيف البكتريا بإستخدام صبغة محضرة ف المعمل⚗ بتراكيز معينة.

⇐وعن طريقها صنف البكتريا لنوعين أساسين✌وهم ↓:


1⃣Gram Positive Bacteria:-

تصبغ باللون الازرق 🔵


2⃣Gram Negative Bacteria:-

⇐تصبغ باللون الاحمر🔴

══۞══۞══۞══۞══۞══

⏪يلا عملية التصبيغ دا بتم ف الخطوات التالية ↓ :

① في البداية بكون عندنا عينتين مجهولتين من البكتريا واحدة ⇐ Gram -ive والتانية ⇐ Gram +ive ،بناخدهم من >> fresh culture ,ونضع كل عينة ف Slide منفصل.
______________
② اذا كانت العينة المأخوذة من ال Culture جاافة ⇐ بنقوم نضعها في وسط رطب ↓

#Liquid_Medium

⇐ عشان يحصل ليها إذابة⇐ Dilution ،وبالتالي يسهل تحريكها على الشريحة Slide.😉
_______________
③ بنقوم نحرك العينة على ال Slide ح تتكون طبقة رقيقة من الخلايا على الشريحة📏، ومن ثم نقوم ب تمرير الشريحة على لهب موقد بنزن🔥

#Bunsen_Burn

⇐ الى حين تتثبت العينة على الشريحة الزجاجية،الخطوة دي إسمها

#Fixation

⇐ يشترط إنو العينة م تكون جافة شديد:

#Very_Hard❌
________________
④ بعد عملية ال fixation، بنضيف مادة إسمها ↓

#Crystal_Violet_Dye

⇐ لمدة 30-40 ثانية ⏰ ومن ثم بنضيف الماء💦 على الشريحة ⇐ عشان نتخلص من الكميات الزائدة من الصبغة.

⇐ النتيجة إنو كل الخلايا ف الشريحتين بتصبغ باللون الازرق أو البنفسجي ↓

Blue/Purple.
_______________
⑤ في الخطوة التانية بنضيف محلول الايودين Iodine Solutin لمدة دقيقة واحدة ،ح تتفاعل مع ال Crystal Violet وينتج عنها ↓

#Crystal_Violet_iodine_Complex🤨

⇐ الهدف من إضافة الايودين إنها تكون المركب أعلاه وبالتالي تثبت الصبغة ف الخلايا😙

⇐ وبالتالي كل خلايا العينتين ح تظل لونها ازرق او بنفسجي✋😇
_______________
⑥ في الخطوة التالتة بنضيف مذيب عضوي للعينة ↓

#Organic_Solvent

⇐ مثل الكحول:

Acetone or Ethanol

⇐ الهدف منها نزع الصبغة من الخلايا.
____________
⑦ بعدها بنغسل الشريحة بالماء >> لازالة الكميات الزائدة من ال Ethanol ,بنلاحظ الآتي:

⇐ إذا كان الشريحة محتوي على بكتريا

Gram+ive
⇐ ح تظل لونها أزرق.

أما اذا كان الاسليد محتوي على بكتريا:

Gram -ive

⇐ ح تفقد لونها ↓

#Decolorization

⇐ يعني ح تفقد البكتريا اللون الازرق وتبقى عديمة اللون ↓

#Colorless

#ملحوظة🚨👇:

❍ أثناء إضافة ال Ethanol , يجب وضع الشريحة بشكل مائل بزاوية معينة، وأن يضاف ال Ethanol على شكل قطرات 💦⇐ تفاديا لحدوث ↓

#Excessive_Decolorization

⇐ والذي بإمكانه نزع الصبغة بكميات كبيرة حتى من العينة 👈 Gram +ive.
_________________
⑧ في الخطوة الاخيرة بنضيف الصبغة الحمراء ↓

#Safranin_Stain

⇐ واحياناة مادة تانية إسمها ↓

#Fuchsine

⇐ لكل من الشريحتين ،لمدة 👈 20 - 30 ثانية.

⇐ بعدها بنقوم بغسل الشريحتين بالماء بيظهر الاتي :

⇐ العينة Gram +ive ⇐ يظل لونها ازرق أو بنفسجي ↓

Blue/Purple

⇐ أما العينة ال Gram -ive 👈 اللي كان حصل ليها Declorization ف الخطوة السابقة ⇐ حتصبغ باللون الوردي أو الاحمر ↓

#Red/Pink.🤯

⇐ في الحقيقة ال Safranin بتصبغ العينتين باللون الاحمر😎⇐ و لكن لأن العينة Gram +ive مصبوغة باللون الازرق الغامض من قبل ⇐ بالتالي م بيظهر فيها اللون الاحمر✋☺️
══۞══۞══۞══۞══۞══

⏪بعد عرفنا خطوات التصبيغ نجي لتفسير التفاعلات:

۞ فكرة ال Gram Stain تكمن في جدار الخلية البكتيرية🤔!! ↓

#Cell_Wall_Peptidoglycan

۞ زيما عرفنا ف البوست الفات انو ال Peptidoglycan بتاعت ال Gram +ive بتكون More Thick عنه ف البكتريا 👈 Gram -ive اللي عندها Thin Layer من ال Peptidoglycan👍.

۞ عشان كدة لما نضيف الكحول بقوم بتذويب الطبقة ال Thin بتاعت ال Gram -ive 👈 وبالتالي الخلية يحصل ليها ↓

#Declorization🧐.

۞ برضو بيقولوا انو الكحول في حالة ال Gram -ive بيكسر ال Thin Layer وبالتالي بتزيد من الثقوب الموجودة على ال Cell Wall وبكدة تزيد من نفاذية الصبغة ↓

#Crystal_Violet_iodine_Complex✋

۞ أما ف حالة ال Gram +ive ، طبقة ال Peptidoglycan السميكة تعمل كعازل 😉 تمنع نفازية ال ↓

#Crystal_Violet_iodine_Complex

⇐ وبالتالي الخلية تحتفظ بالصبغة الزرقاء🤓.

#فيديو_توضيحي

#صورة_رقم_1_20

#صورة_رقم_1_21

══۞══۞══۞══۞══۞══
✭ في بعض أنواع البكترياء م بتخدع لطريقة ال Gram stain،تم تصنيفها لنوعين من المجموعات ع حسب سبب عدم الاستجابة للصبغة🧐:

1)Gram Variable Bacteria.

2)Gram indeterminate Bacteria.

✭ نمسك واحدة واحد

BMS.MICROBIOLOGY

[﷽]
السلام عليكم👋

#Microbiology:-
#General_Bacteriology:-

#بوست_رقم_[5]:-


GRAM STAIN:-
"""""""""""""""""""""

❐ في البدء نووه إنو الجزئية دي تابعة للعملي🔬، ولكن لأهميتها كان لابد من دراستها.

❐ في عام 1884م فكر🤔 العالم الدنماركي 👈 Christian Gram ف تصنيف البكتريا بإستخدام صبغة محضرة ف المعمل⚗ بتراكيز معينة.

⇐وعن طريقها صنف البكتريا لنوعين أساسين✌وهم ↓:


1⃣Gram Positive Bacteria:-

تصبغ باللون الازرق 🔵


2⃣Gram Negative Bacteria:-

⇐تصبغ باللون الاحمر🔴

══۞══۞══۞══۞══۞══

⏪يلا عملية التصبيغ دا بتم ف الخطوات التالية ↓ :

① في البداية بكون عندنا عينتين مجهولتين من البكتريا واحدة ⇐ Gram -ive والتانية ⇐ Gram +ive ،بناخدهم من >> fresh culture ,ونضع كل عينة ف Slide منفصل.
______________
② اذا كانت العينة المأخوذة من ال Culture جاافة ⇐ بنقوم نضعها في وسط رطب ↓

#Liquid_Medium

⇐ عشان يحصل ليها إذابة⇐ Dilution ،وبالتالي يسهل تحريكها على الشريحة Slide.😉
_______________
③ بنقوم نحرك العينة على ال Slide ح تتكون طبقة رقيقة من الخلايا على الشريحة📏، ومن ثم نقوم ب تمرير الشريحة على لهب موقد بنزن🔥

#Bunsen_Burn

⇐ الى حين تتثبت العينة على الشريحة الزجاجية،الخطوة دي إسمها

#Fixation

⇐ يشترط إنو العينة م تكون جافة شديد:

#Very_Hard❌
________________
④ بعد عملية ال fixation، بنضيف مادة إسمها ↓

#Crystal_Violet_Dye

⇐ لمدة 30-40 ثانية ⏰ ومن ثم بنضيف الماء💦 على الشريحة ⇐ عشان نتخلص من الكميات الزائدة من الصبغة.

⇐ النتيجة إنو كل الخلايا ف الشريحتين بتصبغ باللون الازرق أو البنفسجي ↓

Blue/Purple.
_______________
⑤ في الخطوة التانية بنضيف محلول الايودين Iodine Solutin لمدة دقيقة واحدة ،ح تتفاعل مع ال Crystal Violet وينتج عنها ↓

#Crystal_Violet_iodine_Complex🤨

⇐ الهدف من إضافة الايودين إنها تكون المركب أعلاه وبالتالي تثبت الصبغة ف الخلايا😙

⇐ وبالتالي كل خلايا العينتين ح تظل لونها ازرق او بنفسجي✋😇
_______________
⑥ في الخطوة التالتة بنضيف مذيب عضوي للعينة ↓

#Organic_Solvent

⇐ مثل الكحول:

Acetone or Ethanol

⇐ الهدف منها نزع الصبغة من الخلايا.
____________
⑦ بعدها بنغسل الشريحة بالماء >> لازالة الكميات الزائدة من ال Ethanol ,بنلاحظ الآتي:

⇐ إذا كان الشريحة محتوي على بكتريا

Gram+ive
⇐ ح تظل لونها أزرق.

أما اذا كان الاسليد محتوي على بكتريا:

Gram -ive

⇐ ح تفقد لونها ↓

#Decolorization

⇐ يعني ح تفقد البكتريا اللون الازرق وتبقى عديمة اللون ↓

#Colorless

#ملحوظة🚨👇:

❍ أثناء إضافة ال Ethanol , يجب وضع الشريحة بشكل مائل بزاوية معينة، وأن يضاف ال Ethanol على شكل قطرات 💦⇐ تفاديا لحدوث ↓

#Excessive_Decolorization

⇐ والذي بإمكانه نزع الصبغة بكميات كبيرة حتى من العينة 👈 Gram +ive.
_________________
⑧ في الخطوة الاخيرة بنضيف الصبغة الحمراء ↓

#Safranin_Stain

⇐ واحياناة مادة تانية إسمها ↓

#Fuchsine

⇐ لكل من الشريحتين ،لمدة 👈 20 - 30 ثانية.

⇐ بعدها بنقوم بغسل الشريحتين بالماء بيظهر الاتي :

⇐ العينة Gram +ive ⇐ يظل لونها ازرق أو بنفسجي ↓

Blue/Purple

⇐ أما العينة ال Gram -ive 👈 اللي كان حصل ليها Declorization ف الخطوة السابقة ⇐ حتصبغ باللون الوردي أو الاحمر ↓

#Red/Pink.🤯

⇐ في الحقيقة ال Safranin بتصبغ العينتين باللون الاحمر😎⇐ و لكن لأن العينة Gram +ive مصبوغة باللون الازرق الغامض من قبل ⇐ بالتالي م بيظهر فيها اللون الاحمر✋☺️
══۞══۞══۞══۞══۞══

⏪بعد عرفنا خطوات التصبيغ نجي لتفسير التفاعلات:

۞ فكرة ال Gram Stain تكمن في جدار الخلية البكتيرية🤔!! ↓

#Cell_Wall_Peptidoglycan

۞ زيما عرفنا ف البوست الفات انو ال Peptidoglycan بتاعت ال Gram +ive بتكون More Thick عنه ف البكتريا 👈 Gram -ive اللي عندها Thin Layer من ال Peptidoglycan👍.

۞ عشان كدة لما نضيف الكحول بقوم بتذويب الطبقة ال Thin بتاعت ال Gram -ive 👈 وبالتالي الخلية يحصل ليها ↓

#Declorization🧐.

۞ برضو بيقولوا انو الكحول في حالة ال Gram -ive بيكسر ال Thin Layer وبالتالي بتزيد من الثقوب الموجودة على ال Cell Wall وبكدة تزيد من نفاذية الصبغة ↓

#Crystal_Violet_iodine_Complex✋

۞ أما ف حالة ال Gram +ive ، طبقة ال Peptidoglycan السميكة تعمل كعازل 😉 تمنع نفازية ال ↓

#Crystal_Violet_iodine_Complex

⇐ وبالتالي الخلية تحتفظ بالصبغة الزرقاء🤓.

#فيديو_توضيحي

#صورة_رقم_1_20

#صورة_رقم_1_21

══۞══۞══۞══۞══۞══
✭ في بعض أنواع البكترياء م بتخدع لطريقة ال Gram stain،تم تصنيفها لنوعين من المجموعات ع حسب سبب عدم الاستجابة للصبغة🧐:

1)Gram Variable Bacteria.

2)Gram indeterminate Bacteria.

✭ نمسك واحدة واحد

hottg.com/bmsmicrobiology/65

7.4K viewsبدرالدين محمد Bedro, Sep 26, 2019 at 08:11